Mutacje w DSTYK i dominujące wady rozwojowe dróg moczowych AD 7

DSTYK wykryto również we wszystkich warstwach przejściowego nabłonka moczowodowego oraz w moczowodowych komórkach mięśni gładkich (Figura 2D). Morpholino Knockdown w danio pręgowany
Aby zbadać rolę DSTYK w rozwoju embrionalnym, przeprowadziliśmy knockdown ortologa u danio pręgowanego. Przy maksymalnym obezwładnieniu zarodki wykazały opóźnienie wzrostu, o czym świadczą małe płetwy, nieprawidłowa morfogeneza ogona i utrata bicia serca (ryc. S6 w dodatkowym dodatku); obserwowaliśmy również malformacje kloaki, które odpowiadają niższym zaburzeniom układu moczowo-płciowego u ssaków i defektom w rozwoju żuchwy, a także specyficznej utracie mediany fałdy płetw. Wysięk osierdziowy był widoczny w 5-dniowych larwach morfologicznych, które można przypisać zarówno niewydolności serca, jak i nerek. Dane te sugerują istotną rolę DSTYK w rozwoju głównych narządów. Obserwowane defekty rozwojowe przypominają fenotypy wytworzone przez globalną utratę sygnalizacji FGF u danio pręgowanego.14-16
Kolokalizacja receptorów DSTYK i FGF oraz wpływ na fosforylację ERK
W rozwijającym się mysim nefronie (zarodkowy dzień 15.5), DSTYK kolokalizuje z komórkami, które są dodatnie pod względem e-kadheryny i tymi, które są ujemne pod względem e-kadheryny, co potwierdza ich ekspresję zarówno w mezenchymie metanephrycznym, jak iw moczowodzie (fig. 2G i 2H) . Lokalizacja DSTYK do błony komórkowej w mezenchymie metanometrycznym i pączku moczowodu wysoce odpowiada znanemu wzorowi ekspresji receptorów FGF. Wspólne immunobarwienie potwierdziło, że DSTYK kolokalizuje zarówno z FGFR1, jak i FGFR2 w pączku moczowodu i ciałach w kształcie przecinka (ryc. 2G i 2H, i ryc. S7 w dodatku uzupełniającym). Kolokalizacja za pomocą FGFR2 była również widoczna w dalszych komórkach kanalikowych w rdzeniu nerkowym dorosłego i brodawki (ryc. S8 w dodatku uzupełniającym). Punktowanie barwienia DSTYK obserwowano w szczytowych komórkach komórkowych wyściełających nabłonek moczowodu (Fig. S9 i S10 w Dodatku Uzupełniającym).
Po aktywacji receptory FGF wyzwalają cytoplazmatyczne kinazy białkowe, co skutkuje fosforylacją ERK, która jest głównym efektorem indukowanej przez FGF aktywności transkrypcyjnej.17,18 Ponieważ DSTYK koduje kinazę i kolokalizuje się z FGFR1 i FGFR2, postawiliśmy hipotezę, że DSTYK działa jako pozytywny. regulator sygnalizacji za pośrednictwem FGF w nerce. Aby przetestować tę hipotezę, przeprowadziliśmy knockdown DSTYK w ludzkiej embrionalnej linii komórek nerkowych 293T, co spowodowało zmniejszenie do 80% poziomów transkryptu i wyraźne obniżenie poziomów białka DSTYK w ciągu pierwszych 96 godzin po transfekcji ( Ryc. 2I i ryc. S11 w dodatkowym dodatku). Stymulacja FGF zwiększała poziomy fosforylowanego ERK (pERK) zgodnie z oczekiwaniami, ale wyciszanie siRNA DSTYK znacząco zapobiegało fosforylacji ERK (Figura 2I)
[hasła pokrewne: kardiolog garwolin, boraks apteka, dermatolog szczecin prawobrzeże ]